实验台上真正会用到的克隆方法:设计与校验工具。
检查同源臂并把多个 DNA 片段拼成一条序列。
检查 4 nt 粘性末端兼容性并一步组装 Type IIs 部件。
设计 15 bp 同源臂并按同源重组组装片段。
定位载体与插入片段上的 attB 位点并生成表达克隆。
用 25 bp 同源臂规划 SLiCE 无缝连接反应。
模拟把 PCR 产物通过 TA / TOPO 克隆进线性载体。
一步设计点突变、插入与缺失所需的引物。