CFU 与克隆形成率
CFU / 克隆形成率计算器
估算克隆形成率(PE)、CFU/mL,以及为获得目标克隆数需接种的细胞数。
PE% = 克隆数 ÷ 接种细胞数 × 100;CFU/mL = 克隆数 ÷ 体积(mL) × 稀释倍数。
克隆形成率(PE)
24.00%
典型范围:10–30%
CFU/mL
12,000CFU/mL
| 目标克隆数 | 需接种细胞数 |
|---|---|
| 已计数 50 个克隆 | 208.33 |
| 已计数 100 个克隆 | 416.67 |
| 已计数 200 个克隆 | 833.33 |
| 已计数 500 个克隆 | 2,083.3 |
按当前 PE 反推获得目标克隆数所需接种的细胞数。
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功能简介
克隆形成率(PE)是接种细胞中能形成可见克隆的比例,CFU/mL 是原样品中克隆形成单位的浓度。二者共同描述一群细胞的克隆能力及其铺板前的密度。计算器把一个简单的克隆计数转化为 PE、CFU/mL,以及对应常用目标克隆数的接种表。
原理与公式
克隆形成率 PE% = 克隆数 ÷ 接种细胞数 × 100。克隆形成单位浓度为 CFU/mL = 克隆数 ÷ 体积(mL) × 稀释倍数,其中稀释倍数用于校正铺板前的样品稀释。要做实验规划可反推 PE 关系:需接种细胞数 = 目标克隆数 ÷ (PE / 100)。
演算示例
接种 500 个细胞长出 120 个克隆,PE = 24.00%;若 0.1 mL 的 10 倍稀释液长出 120 个克隆,则为 12,000 CFU/mL。在 PE 24% 下,要拿到 50、100、200、500 个克隆,分别需接种 208、417、833、2,083 个细胞。
适用场景
在搭建克隆实验、验证冻存细胞库或规划为得到特定克隆数应铺多少细胞时使用本计算器。PE 也是一项质量指标:多数哺乳动物细胞系落在 10–30% 区间,原代细胞与难克隆细胞系通常低于 10%,而 PE 随传代次数、血清批次与铺板密度漂移,提示培养状态发生变化。
常见问题
- 克隆形成率(PE)和活率(viability)有什么区别?
- 活率用台盼蓝等法测某时刻存活细胞的比例,并不说明一个细胞能否分裂。PE 测的是接种细胞中能形成完整克隆的比例,反映的是克隆生长潜能而非单纯存活。一个群体可能 95% 存活,却因多数活细胞无法完成多次分裂而 PE 只有 20%。
- CFU 样品为什么铺板前要稀释?
- 未稀释样品通常会长出过多克隆而无法准确计数,并连成一片。稀释能把计数带入 30–300 区间,此时单个克隆可分离、统计可靠。随后乘以稀释倍数即可还原原未稀释样品的真实 CFU/mL。
- 克隆形成率(PE)多少算正常?
- 多数稳定的哺乳动物细胞系 PE 约为 10–30%。原代细胞与难克隆细胞系通常低于 10%,部分悬浮系更低。PE 还会随传代次数、血清批次与铺板密度变化,因此应与同一细胞系在相同条件下的历史值比较,而非对照某个绝对标准。
- 克隆数少于 30 或多于 300 为什么要重铺?
- 低于 30 个克隆时取样误差很大,多一个克隆就会大幅改变百分比。高于 300 个克隆时克隆开始合并、争夺空间与营养,真实计数被低估。30–300 是计数既精确又无偏的范围,因此超出此范围的板应在不同稀释度下重铺。