qPCR 标准曲线计算器
根据系列稀释标准品估算扩增效率、斜率与 R²，并反算未知样品的模板拷贝数。
已解析 6 个 Cq 值
可选：输入未知样品 Cq 以估算其拷贝数。
扩增效率
99.9%
斜率
-3.3243
截距
38.29
R²
1.00000
每 10 倍稀释的 ΔCq
3.32
| 标准品（拷贝数） | Cq | 拟合值 | 残差 |
|---|---|---|---|
| 1.000×10^7 | 15.02 | 15.02 | -0.001 |
| 1.000×10^6 | 18.35 | 18.35 | 0.005 |
| 100,000 | 21.66 | 21.67 | -0.010 |
| 10,000 | 25.01 | 24.99 | 0.016 |
| 1,000 | 28.30 | 28.32 | -0.018 |
| 100 | 31.65 | 31.64 | 0.008 |
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功能简介
qPCR 标准曲线把稀释系列各点的 Cq 值转化为循环数与模板量之间的定量关系，是确认实时 PCR 实验按预期扩增后再用于绝对或相对定量的标准做法。计算器对标准品拟合直线，并报告斜率、截距、R²、扩增效率与实测的每 10 倍稀释 ΔCq。
原理与公式
标准曲线满足 Cq = slope × log10(N) + intercept，其中 N 为模板拷贝数。扩增效率 E = 10^(-1/slope) - 1，因此 E = 1 即 100% 效率；理想斜率为 -3.32，因为 10 倍稀释应使 Cq 移动约 3.32 个循环。反向关系为 slope = -1 / log10(1 + E)。要反推未知样品模板量，使用 template = 10^((Cq - intercept) / slope)。
演算示例
最高标准品 1×10^7 拷贝、10 倍稀释 6 个点，Cq 依次为 15.02、18.35、21.66、25.01、28.30、31.65，拟合得到斜率 -3.3240、截距 38.29、R² 0.999996、效率 99.90%、每 10 倍稀释 ΔCq = 3.32。未知样品 Cq = 24.80 反算得到 1.14×10^4 拷贝。
适用场景
当你需要绝对定量（例如报告每反应的目标拷贝数或每微升样品的拷贝数）时应使用标准曲线。在实验验证阶段运行它，确认斜率接近 -3.32、效率落在 90–110% 范围内，再采信基于 Cq 的结果。更换试剂、新引物对或不同板后，也应运行它作为检查，此时斜率偏移或 R² 偏低往往提示移液或反应问题。
常见问题
- qPCR 扩增效率怎么算，多少算合格？
- 效率公式为 E = 10^(-1/slope) - 1，以百分数表示（E = 1 即 100%）。效率为 100% 时斜率约为 -3.32，因为 10 倍稀释应使 Cq 改变约 3.32 个循环（即 ΔCq ≈ 3.32）。用于定量时，效率落在 90–110%（斜率约 -3.58 至 -3.10）一般视为合格。
- 为什么 qPCR 标准曲线的斜率是负的？
- 因为模板量越高，达到阈值的 Cq 越小：浓度更高的标准品需要的循环数更少。因此 log10(模板量) 与 Cq 呈反比，拟合直线斜率必然为负。斜率越陡（越负）效率越低，理想 100% 效率对应 -3.32。
- 标准曲线的 R² 要多高才好？
- 目标是 R² 至少 0.99，用于绝对定量时最好达到 0.999 或更高。R² 低于约 0.98 说明各点偏离拟合直线，通常源于稀释系列的移液误差、模板不均或实验噪声。遇到低 R² 应重做标准品，而不是采信其拷贝数输出。
- 每 10 倍稀释的 ΔCq 应该是多少？
- 对 100% 效率的理想实验，每 10 倍稀释使 Cq 恰好移动 log10(10) × 3.32 = 3.32 个循环。实际中相邻 10 倍标准品间的 ΔCq 应接近 3.3，明显偏离（如 2.5 或 4.5）说明效率不理想。此处报告的 ΔCq 是各标准品间间隔的平均值。