蛋白定量标准曲线计算器
基于 BCA 或 Bradford 标准曲线，由吸光度反算蛋白浓度。
浓度与吸光度必须逐点按相同顺序列出。
样品浓度
—µg/mL
斜率
4.9571e-4
截距
0.0024
灵敏度
2,017.3
| 浓度 (ug/mL) | 吸光度 | 拟合值 | 残差 |
|---|---|---|---|
| 0 | 0.000 | 0.002 | -0.002 |
| 250 | 0.125 | 0.126 | -0.001 |
| 500 | 0.252 | 0.250 | 0.002 |
| 750 | 0.374 | 0.374 | -0.000 |
| 1,000 | 0.505 | 0.498 | 0.007 |
| 1,500 | 0.741 | 0.746 | -0.005 |
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功能简介
蛋白定量标准曲线计算器把比色法蛋白定量的吸光度读数换算成样品浓度。你提供一组已知浓度的标准品及其测得的吸光度，工具拟合出连接浓度与信号的一条直线，再从这条线上读出未知样品。BCA 与 Bradford 共用同一套数学，差别只在化学原理与适用区间。
原理与公式
标准曲线是吸光度对浓度的线性回归：A = slope × conc + intercept。反算浓度时取逆：conc = (A - intercept) / slope，其中 A 为样品吸光度。若结果小于 0，说明样品落在曲线截距之下（低于空白），此时不显示浓度。原液浓度等于实测浓度乘以稀释倍数。灵敏度即 1 / slope：每单位吸光度对应多少 ug/mL 蛋白。
演算示例
标准品 0、250、500、750、1000、1500 ug/mL 对应吸光度 0.000、0.125、0.252、0.374、0.505、0.741，拟合得到斜率 4.9571e-4、截距 0.00236、R² = 0.99977，灵敏度约 2017 ug/mL 每吸光度单位。样品 A = 0.149（稀释 10 倍）反算得 295.8 ug/mL，折算回原液为 2958 ug/mL，即 2.96 mg/mL。
适用场景
当你用酶标仪比色法定蛋白、需要得到裂解液、纯化组分或条件培养基的浓度时，就用这个工具。当你要把多个样品放在同一条曲线上比较，或样品落在标准区间边缘、需要判断数字是否可信时，它尤为有用。BCA 的可用区间约为 20–2000 ug/mL，Bradford 约为 100–1400 ug/mL；超出后应稀释重测，而非外推。
常见问题
- BCA 和 Bradford 我该选哪个？
- 当样品处于会干扰 Bradford 的变性剂或还原缓冲液中，或你需要更宽的 20–2000 ug/mL 区间时用 BCA。Bradford 读数更快、在 100–1400 ug/mL 区间更敏锐，适合常规定量。两者都用同一台酶标仪读数，选择主要取决于缓冲液兼容性与预期浓度。
- 为什么要减空白，零浓度点起什么作用？
- 零浓度（空白）读数是试剂与孔板带来的背景，并非来自蛋白。把它作为曲线的截距可扣除该偏移，使浓度以真零为基准。若跳过它，每个样品都会偏高一个空白的量。
- R² 多少才算可信？
- 定量结果建议 R² 至少达到 0.99。0.95–0.99 之间说明曲线勉强可用但建议复测，低于 0.95 则噪声过大、浓度不可靠。工具会在低于 0.99 时给出告警，方便你检查加样或标准品。
- 样品吸光度超出标准品范围怎么办？
- 若样品读数高于最高标准品或低于最低标准品，计算器会外推并给出提示，而非给出可信数值。正确做法是将样品稀释进已校准区间后重测，再乘回稀释倍数。外推点不应作为报告数据。