SLiCE 的同源臂该多长？

常用默认 25 bp，多数构建都适用。短至 15 bp 也可能成功；片段较大时把臂长提到 50 bp 能提高效率。

PCR 产物需要纯化吗？

强烈建议纯化。残留的引物与模板会与目标重组竞争，抬高背景。

结果相同（无缝连接），但试剂不同。Gibson 是成分明确的三酶混合液，SLiCE 是带重组活性的粗制细胞裂解液。

可以。多片段组装原理相同，但片段越多效率越低；每个接缝都要设计各不相同的同源臂。

用廉价的细菌裂解液做无缝克隆 —— 设定同源臂长度并得到重组序列。

同源臂长度 (bp)同源臂越长重组效率越高，但合成成本也越高。

载体（已线性化）

0 bp

插入片段 / PCR 产物

0 bp

载体与插入片段序列都需要填写。

SLiCE 用携带 λ Red 重组系统的细菌裂解液连接带短同源末端的片段。设定臂长、粘贴载体与插入片段，即可得到产物与四条同源臂序列。

输入线性化载体与插入片段。选择要加到引物上的同源臂长度 —— 常用默认 25 bp；短至约 15 bp、长至约 50 bp 都能反应。

SLiCE（Seamless Ligation Cloning Extract）是实验室自制的试剂：表达 λ Red 重组系统的大肠杆菌裂解液。它在体外连接带同源末端的 DNA 片段，以几乎为零的试剂成本实现类 Gibson 的无缝克隆。

工具取载体末段 N 个碱基作为其 3′ 臂，插入片段首尾各 N 个碱基作为其 5′ 与 3′ 臂，载体首段 N 个碱基作为其 5′ 臂，产物为「载体 + 插入片段核心区」。四条臂全部列出，方便你直接粘进引物订购表。

臂长设为 25 bp 时，3.0 kb 载体与 1.2 kb 插入片段得到 4.2 kb 产物，并列出四条 25 bp 臂序列，分别加到载体引物与插入片段引物上。

适合在不购买商业预混液的前提下做类 Gibson 无缝克隆、同时组装多个片段，或用于预算有限的教学实验。

SLiCE 的同源臂该多长？: 常用默认 25 bp，多数构建都适用。短至 15 bp 也可能成功；片段较大时把臂长提到 50 bp 能提高效率。
PCR 产物需要纯化吗？: 强烈建议纯化。残留的引物与模板会与目标重组竞争，抬高背景。
SLiCE 与 Gibson 一样吗？: 结果相同（无缝连接），但试剂不同。Gibson 是成分明确的三酶混合液，SLiCE 是带重组活性的粗制细胞裂解液。
SLiCE 能组装两个以上片段吗？: 可以。多片段组装原理相同，但片段越多效率越低；每个接缝都要设计各不相同的同源臂。